Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология


На правах рукописи


БУТУСОВА Валерия Николаевна


СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ

Характеристики ЭРИТРОЦИТАРНЫХ МЕМБРАН

ПРИ ДИСЛИПОПРОТЕИНЕМИЯХ


03.00.04 – биохимия

14.00.16 – патологическая физиология
АВТОРЕФЕРАТ


диссертации на соискание ученой степени кандидата мед наук


Новосибирск-2007

Работа выполнена в ГОУ ВПО Сибирском муниципальном мед институте Федерального агентства Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология по здравоохранению и соц развитию, в ГУ Научно-исследовательском институте биохимии СО РАМН



^ Научные руководители:





доктор мед наук,

доктор, академик РАМН


Панин Лев Евгеньевич

доктор мед наук,

доктор



Рязанцева Наталья Владимировна

^ Официальные оппоненты:





доктор мед наук,

доктор

Колпаков Аркадий Ростиславович

доктор Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология мед наук,

доктор

Трунов Александр Николаевич



Ведущая организация: ГОУ ВПО Красноярская муниципальная мед академия Росздрава


Защита состоится «__» _________ 2007 г. в __ часов на заседании диссертационного совета Д 001.034.01 в Муниципальном учреждении Научно-исследовательском институте биохимии СО РАМН Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология по адресу: 630117, Новосибирск, ул. Академика Тимакова, 2


С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ Научно-исследовательского института биохимии СО РАМН


Автореферат разослан «___» ___________ 2007г.


Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат био наук Российских Г.С Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология.




^ ОБЩАЯ Черта РАБОТЫ

Актуальность исследования. Бессчетные экспериментальные, клинические и эпидемиологические исследования внушительно свидетельствуют о главный роли дислипопротеинемий в патогенезе огромного числа социально-значимых болезней (ишемическая болезнь сердца, сладкий диабет, ожирение, гипотериоз и Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология др.). При сладком диабете типа 1 и 2 дислипопротеинемии связаны сначала с нарушением гормональной регуляции метаболических процессов и являются одним из причин развития сосудистых осложнений, определяя тяжесть течения заболевания [Manzato E. et al., 1989; Hanefeld M., 1994; Панин Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология Л.Е., 2000; Деменкова А.П., 2001; Яфасов К.М., Дубянская Н.В., 2001; Потеряева О.Н. и соавт., 2003; Vergès B., 2005; Lapolla A. et al., 2006]. Важным из системных конфигураций при патологии липидного Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология обмена является нарушение метаболизма липидов мембранных структур [Bryszewska M. et al., 1979; Godin D.V., Herring F.G., 1981; Otsuji S. et al., 1981; Kamada T., Otsuji S., 1983; Watala C., Winocour P.D., 1992; Faloia E Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология., 1999].

Клеточные мембраны являются одним из главных звеньев сложной системы обмена липидов в организме. Они не только лишь сами содержат липиды как структурный элемент, да и участвуют в переносе последних методом пассивного транспорта и активного Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология рецепторопосредованного эндоцитоза [Титов В.Н.,2000; Rigotti A. et al., 2003]. В самой мембране выделяют липидную фазу, состоящую приемущественно из фосфолипидов и холестерина. Липидные молекулы, являясь необходимыми структурными и многофункциональными компонентами клеточной мембраны Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология, регулируют подвижность и активность мембраносвязанных белков, определяя адаптационный потенциал клеточки [Крепс Е.М., 1982; Геннис Р., 1997; Титов В.Н., 2002; Болдырев А.А., 2006]. Соотношение главных липидных фракций, степень насыщенности жирных кислот, входящих в их состав, определяют Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология такое понятие как «текучесть» липидного бислоя мембраны, оказывают влияние на упорядоченность липидных молекул, также нрав липид-липидных и белок-липидных взаимодействий [Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е., 1980; Новиков К.Н Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология., 2004; Allen H.G., 2006]. Возрастание микровязкости липидной фазы плазматических мембран закономерно приводит к понижению активности мембраносвязанных ферментов, торможению связывания рецепторов с лигандами и нарушению других важных для клеточки процессов [Shinitzky M.,1984; Сомова Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология О.Г. и соавт., 1997; Горошинская И.А. и соавт., 1999; Corver J. et al., 2000; Decsi T. et al., 2002].

Невзирая на явную роль обмена мембранных липидов в реализации бессчетных многофункциональных параметров клеток, в текущее Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология время нет точных представлений о регуляции этого процесса. Выделяют внутриклеточные механизмы регуляции метаболизма липидов плазматической мембраны, которые осуществляются через биосинтетические процессы самой клеточки с ролью ядра и других органелл [Геннис Р.,1997]. Но принципиальный Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология вклад заносят и другие механизмы регуляции, к которым относятся действие фосфолипаз, вторичных посредников (фосфатидилинозитолтрифосфат, Са2+), система свободно-радикального окисления и т.д. [Климов А.Н., Никульчева Н.Г., 1999; Daleke D.L., 2003; Новицкий В.В Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология. и соавт., 2004].

В мембранах вместе с липидами, крепко связанными с белками цитоскелета, есть формы липидов, которые свободно обмениваются с плазменными липопротеинами. В связи с этим конфигурации состава липидов мембран, а Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология именно клеток крови, могут быть результатом взаимодействия с липопротеинами [Quarford S.H., 1970; Faergeman O., Havel R.J., 1975; Poon R., 1981; Hollan S. et al., 1995, 1996; Broncel M. et al., 2005].

Универсальной моделью плазматических мембран, полностью Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология подходящей для исследования воздействия на их внеклеточных воздействий, в том числе и воздействия липопротеинового состава крови, является мембрана эритроцитов. Так как мембране эритроцитов присущи общие принципы молекулярной организации, выявленные закономерности их функционирования Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология полностью допустимо экстраполировать на плазматические мембраны других клеток. Не считая того, видимая простота организации эритроцита позволяет учить метаболизм, структуру и многофункциональные характеристики плазматической мембраны без тех помех, которые есть в клеточках Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология с развитыми внутриклеточными мембранными образованиями и органеллами [Постнов Ю.В., Орлов С.Н.,1987].

Так как эритроцитарные мембраны свободно обмениваются с липидным компонентом плазменных липопротеинов, внедрение в качестве модели дислипопротеинемии патологических состояний, а именно Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология сладкого диабета типа 1 и 2 с выраженными нарушениями липопротеинового диапазона, может посодействовать раскрыть механизмы регуляции липидного обмена в клеточных мембранах, также уточнить роль дислипопротеинемий в изменении высококачественных и количественных черт мембранных липидов. Необходимость Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология проведения такового исследования продиктована тем фактом, что к истинному времени остается неясной конкретная роль липопротеинов разных классов и их белкового компонента в метаболизме липидов плазматических мембран и механизмах формирования мембранной патологии при дислипопротеинемиях Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология.

^ Цель исследования: выявить особенности конфигураций структурно-функциональных черт мембран эритроцитов при дислипопротеинемиях разного типа.

Для заслуги поставленной цели были сформулированы последующие задачки:

  1. Выявить особенности структурно-функциональных параметров мембран эритроцитов у нездоровых с Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология дислипопротеинемиями при сладком диабете типа 1 и 2.

  2. Установить связь меж нарушениями липидного обмена и структурно-функциональными качествами липидной фазы мембран эритроцитов у нездоровых с сладким диабетом типа 1 и 2.

  3. Изучить в опыте Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология in vitro воздействие липопротеинов разных классов и их белкового компонента (аполипопротеинов А-I, Е и С) на наноструктурные переходы, ответственные за липид-липидные и белок-липидные взаимодействия в эритроцитарных мембранах.

^ Положения, выносимые на Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология защиту:

  1. Нарушения липопротеинового обмена более выражены у пациентов с сладким диабетом типа 2 по сопоставлению с такими у нездоровых сладким диабетом типа 1 и характеризуются значимым повышением содержания в крови липопротеинов очень низкой плотности, триглицеридов Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология и общего холестерина.

  2. Структурно-функциональные конфигурации эритроцитарных мембран при сладком диабете развиваются как часть общих системных нарушений липидного обмена, одним из главных звеньев которых является развитие дислипопротеинемий.

  3. Конфигурации структурных и многофункциональных параметров мембран Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология эритроцитов при дислипопротеинемиях, провождающих сладкий диабет типа 1 и 2, характеризуются структурной перестройкой мембранных липидов, нарушением их микровязкостных параметров и уменьшением активности мембраносвязанной Na+,K+-АТФазы.

  4. В механизмах деяния липопротеинов на клеточные мембраны Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология важную роль играет не только лишь липидный, да и белковый компонент: аполипопротеин A-I понижает микровязкость липидной фазы и изменяет нрав белок-липидных взаимодействий; аполипопротеины С вызывают обратное действие – увеличивают микровязкость липидного Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология бислоя и нарушают белок-липидные взаимодействия; аполипопротеин Е не оказывает мембранотропного эффекта.

^ Научная новизна. В первый раз проведено сравнительное исследование конфигураций структурно-функциональных параметров мембран эритроцитов с учетом особенностей нарушений Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология липопротеинового диапазона крови у нездоровых сладким диабетом типа 1 и 2. Показано, что липидный состав и микровязкостные характеристики мембран эритроцитов значительно нарушаются при увеличении соотношения в сыворотке атерогенных и антиатерогенных фракций липопротеинов. Установлено, что выраженность Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология нарушений липидного обмена у пациентов оказывает влияние на степень дезорганизации плазматических мембран. Рассмотрен вопрос о прямом воздействии как липопротеинов, так и аполипопротеинов на биофизические характеристики плазматических мембран. В первый раз получены экспериментальные Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология данные, свидетельствующие о различном воздействии аполипопротеинов на эритроцитарные мембраны крыс: выраженное понижение микровязкости при действии аполипопротена А-I, повышение ее при действии аполипопротеина С и отсутствие конфигураций при действии аполипопротеина Е.

^ Теоретическая и Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология практическая значимость. В итоге проведенного исследования получены новые данные фундаментального нрава о состоянии мембран эритроцитов при дислипопротеинемиях у нездоровых сладким диабетом типа 1 и 2. Выявленные закономерности позволяют гласить о связи структурных конфигураций клеточных мембран Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология с их биофизическими чертами (микровязкость, липид-липидные и белок-липидные взаимодействия) и активностью мембраносвязанных ферментов (Na+,К+-АТФаза). Они также свидетельствуют о принципиальной роли межсистемных взаимодействий: клеточные мембраны и липопротеины Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология сыворотки крови, как функционально активная среда, в какой есть и работают эти мембраны. Установленные нами закономерности указывают на необходимость разработки новых подходов к мембранотропной терапии для корректировки системных нарушений при дислипопротеинемиях Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология.

^ Апробация и внедрение результатов работы. Результаты проведенных исследовательских работ докладывались и дискуссировались на VI международном конгрессе юных ученых и профессионалов «Науки о человеке» (Томск, 2005), на научно-практической межрегиональной конференции, посвященной 70-летию ГОУ ВПО Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология НГМА Росздрава «Актуальные задачи современной эндокринологии» (Новосибирск, 2005), XI Всероссийской научно-практической конференции «Молодые ученые в медицине» (Казань, 2006).

Исследования поддержаны Советом по грантам при Президенте РФ для поддержки ведущих научных школ РФ по Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология дилеммам: «Молекулярные базы нарушений структуры, метаболизма и функции клеток крови при патологии» (НШ-1051.2003.4), «Молекулярные базы нарушения гомеостаза клеток при животрепещущих заболеваниях заразной и неинфекционной природы» (НШ-4153.2006.7).

Публикации. По материалам диссертации размещено 6 работ Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология, из их 3 – в центральных рецензируемых журнальчиках.

^ Объем и структура работы. Диссертация изложена на 153 страничках машинописного текста и состоит из введения, 4 глав (обзор литературы, материал и способы исследования, результаты собственных исследовательских работ, обсуждение Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология результатов исследования), выводов и перечня литературы, включающего 258 источников, из их - 78 российских и 180 забугорных создателей. Работа иллюстрирована 34 таблицами и 7 рисунками.

^ Черта ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО И КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА И Способы ИССЛЕДОВАНИЯ

В базу истинной работы положены результаты Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология всеохватывающего клинико-лабораторного исследования структурно-функционального статуса мембран эритроцитов и особенностей нарушения липопротеинового диапазона у 70 пациентов с сладким диабетом типа 1 и 2 (табл. 1), проводившегося на базе эндокринологической поликлиники ГОУ ВПО «Сибирский муниципальный мед институт Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология Росздрава» (главный доктор – Заслуженный доктор РФ, к.м.н. В.М. Шевелев), эндокринологического отделения ОГУЗ «Томская Областная клиническая больница» (главный доктор – Заслуженный доктор РФ Б.Т Сероватых) и городской поликлиники № 3 г Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология. Томска (главный доктор – М.А. Лукашов). В контрольную группу были включены 20 фактически здоровых донора, не предъявлявших на момент обследования жалоб, парней и дам, в возрасте от 25 до 55 лет.Последующим шагом работы явилось экспериментальное исследование Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология in vitro, проведенное с внедрением крови 27 крыс полосы Вистар.

Было обследовано 27 пациентов, страдающих сладким диабетом типа 1, мужского и дамского пола в возрасте от 19 до 55 лет. Продолжительность заболевания у нездоровых Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология разнообразила от 1 года до 30 лет (средние значения продолжительности диабета – 9,9±2,1 лет), при всем этом 19 человек мучались СД 1 более 5 лет, а 8 пациентов имели стаж диабета наименее 5 лет. Степень компенсации сладкого диабета была определена с учетом содержания глюкозы Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология в сыворотке крови днем натощак и концентрации гликированного гемоглобина (НbА1с). Согласно “Государственным эталонам сладкого диабета” (Федеральная мотивированная программка “Cахарный диабет”, 2002), компенсацию углеводного обмена у пациентов с СД 1 считали при Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология показателе НbА1с ниже 7,0%, субкомпенсацию - от 7,0 до 7,5% включительно, декомпенсацию – выше 7,5%. В связи с этим были выделены группы пациентов с субкомпенсацией (12 человек) и декомпенсацией углеводного обмена (13 пациентов), 2 нездоровых имели компенсированное течение СД 1. У Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология пациентов с СД 1 верифицировали наличие диабетической ретинопатии с внедрением систематизации С. Mongensen et al. [1983]. Диагностику диабетической ретинопатии производили при помощи критериев Е. Koner и M. Porta [1992].

Обследовано 43 нездоровых СД 2 (10 парней и Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология 33 дамы) в возрасте от 39 до 60 лет. Продолжительность диабета у пациентов разнообразила от 1 месяца до 21 года, при всем этом 19 человек мучались СД 2 наименее 5 лет, а 24 – более 5 лет. Характеристики метаболизма глюкозы указывали на декомпенсированное течение заболевания у Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология всех пациентов с СД 2 (декомпенсацию углеводного обмена у пациентов с СД 2 считали при показателе НbА1с выше 7,0%). Посреди пациентов с СД 2 была выделена группа нездоровых (17 человек), у каких верифицирован диагноз ишемическая Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология болезнь сердца (ИБС). Из их только 2 нездоровых имели обычный индекс массы тела, 9 человек мучались ожирением 1 степени (индекс массы тела 30,0-34,9 кг/м2), 4 пациента – ожирением 2 степени (35,0-39,9 кг/ м2), 1 человек – ожирением 3 степени. 14 пациентов с Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология СД 2 мучались только ожирением без ИБС, при этом у 4 пациентов было отмечено ожирение 1 степени, у 5 нездоровых – 2 степени и у 5 человек – 3 степени.


Таблица 1


^ Рассредотачивание здоровых доноров, нездоровых сладким

диабетом типа 1 и 2, экспериментальных животых на группы

в согласовании Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология с использованными способами исследования

липидного диапазона крови и структурно-функциональных

особенностей мембраны эритроцитов




^ Способы исследования

Группы

обследованных

нездоровых

Экспериментальные

животные (крысы)

Здоровые доноры

Пациенты сладким диабетом типа 1

^ Пациенты сладким диабетом типа 2

Количество контрольных проб

Количество опытнейших проб

1

Исследование липидного диапазона крови способом Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология малоуглового рентгеновского рассеяния

20

19

43

-

-

2

Оценка липид-липидных и белок-липидных взаимодействий в мембранах эритроцитов с внедрением флуоресцентного зонда пирен

20

25

41

-

-

3

Определение активности Na+, K+-АТФазы в мембранах эритроцитов

18

25

40

-

-

4

Исследование липидного состава мембран эритроцитов

способом Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология тонкослойной хроматографии

12

14

23

-

-

5

Определение количественного содержания общих липидов в мембранах эритроцитов

12

14

23

-

-

6

Исследование структуры мембран эритроцитов с внедрением флуоресцентного зонда пирен при инкубации мембранной взвеси с липопротеинами высочайшей плотности in vitro

-

-

-

12

12

7

Исследование структуры мембран эритроцитов с внедрением флуоресцентного зонда Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология пирен при инкубации мембранной взвеси с липопротеинами низкой плотности in vitro

-

-

-

9

9

8

Исследование структуры мембран эритроцитов с внедрением флуоресцентного зонда пирен при инкубации мембранной взвеси с липопротеинами очень низкой плотности in vitro

-

-

-

9

9

9

Исследование структуры Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология мембран эритроцитов с внедрением флуоресцентного зонда пирен при инкубации мембранной взвеси с аполипопротеином А-I in vitro

-

-

-

6

6

10

Исследование структуры мембран эритроцитов с внедрением флуоресцентного зонда пирен при инкубации мембранной взвеси с аполипопротеином С Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология in vitro

-

-

-

6

6

11

Исследование структуры мембран эритроцитов с внедрением флуоресцентного зонда пирен при инкубации мембранной взвеси с аполипопротеином Е in vitro

-

-

-

6

6



Все пациенты обследованы в момент диспансеризации на фоне проведения коррегирующей углеводный обмен терапии Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология (препараты групп сульфанилмочевины и бигуанидов для нездоровых СД 2 и инсулинотерапия для пациентов с СД 1). Материалом исследования явилась венозная кровь обследованных лиц, взятая с утра натощак после шестнадцатичасового воздержания от приема жирной еды. Для получения Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология плазмы кровь стабилизировали гепарином (25 Ед/мл).

Определение фракционного и субфракционного составов липопротеинов сыворотки крови было проведено при помощи способа малоуглового рентгеновского рассеяния, предложенного Ф.В. Тузиковым и соавт. [1997]. Нами учитывались концентрации липопротеинов 6 главных Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология подклассов (2 субфракции ЛПВП, 2 субфракции ЛПНП и 2 субфракции ЛПОНП) и величина таких интегральных характеристик как общий холестерин и общие триацилглицериды. Также были рассчитаны отношение общих фосфолипидов к общему холестерину и индекс атерогенности. Индекс Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология атерогенности рассчитывался как отношение (ОХС-ХС ЛПВП)/ХС ЛПВП, где ОХС – общий холестерин, а ХС ЛПВП – холестерин липопротеинов высочайшей плотности. При всем этом нездоровые с нарушенным липидным обменом были распределены по типу Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология ДЛП по систематизации, предложенной D. Fredricson. IIa тип ДЛП регистрировали, если в сыворотке крови значения содержания ХС ЛПНП превосходили 175 мг/дл при обычных величинах концентрации ТГ, IIб тип – если было повышено содержание Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология ХС ЛПНП и ТГ (выше 175 мг/дл для лиц молодее 40 лет и выше 210 мг/дл для пациентов 40 лет и старше), IV тип – если значения ХС ЛПНП были в границах нормы Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология, а концентрация ТГ была завышенной.

Мембраны эритроцитов выделяли методом гипоосмотического гемолиза [Dodge J.T. et al. 1963]. В приобретенной взвеси мембран определяли микробиуретовым способом содержание белка.

Липиды мембран эритроцитов экстрагировали хлороформ-метаноловой консистенцией по способу Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология J. Folch et al. [1957]. Общее содержание липидов в мембране эритроцитов определяли способом Н.А. Тарановой [1987]. Препаративное разделение общих липидов проводили способом тонкослойной хроматографии [Финдлей Дж.Б., Эванз У.Г., 1990] в системе Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология растворителей гептан : диэтиловый эфир : этилацетат (в соотношении 80:20:1,5) на пластинках “Sorbfil” (Наша родина). Разделение фракций фосфолипидов мембран эритроцитов способом тонкослойной хроматографии [Прохорова М.И., 1982] производили в системе хлороформ : метанол : вода (в Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология соотношении 32:12,5:2) на пластинках “Sorbfil”(Наша родина). Идентификацию фракций липидов производили с внедрением соответственных эталонов (компания “Sigma”, США). Количественную оценку хроматограмм проводили при помощи разработанной компьютерной программки.

Черта структурных параметров липидной фазы мембран эритроцитов проводилась с Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология внедрением измерения своей флуоресценции теней эритроцитов и определения спектральных черт взаимодействия мембран с флуоресцентным зондом пирен на спектрофлуориметре “Hitachi-MPF-4” (Япония). Микровязкостные характеристики мембраны в области анулярных и общих Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология липидов оценивали по степени эксимеризации пирена, вычисляя отношение интенсивности флуоресценции эксимеров и мономеров (J470/J370) при длине волны возбуждающего света (lв) 285 и 340 нм, соответственно. Полярность окружения молекул пирена оценивали по отношению J370/J Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология390 при lв=340 нм [Добрецов Г.Е., 1989]. Рассчитывали показатель передвижения энергии с триптофановых остатков на пирен по формуле, предложенной Ю.А. Владимировым и Г.Е. Добрецовым [1980].

Определение активности Na+,K+-АТФазы в мембранах эритроцитов определяли Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология способом, разработанным А.М. Казенновым и соавт. [1984] и основанном на накоплении неорганического фосфора (Рi) в среде, содержащей АТФ, в итоге его гидролиза под действием АТФазы. Содержание Рi определяли по способу Р.S Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология. Chen et al. [1956].

В рамках диссертационной работы был выполнен экспериментальный блок, связанный с исследованием структурной организации эритроцитарных мембран у крыс в критериях инкубации взвеси теней эритроцитов с липопротеинами главных классов (ЛПНП, ЛПОНП Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология, ЛПВП), также их апобелками (аполипопротеинами А-I, С и Е) in vitro. Липопротеины выделяли из сыворотки крови крыс при помощи изоплотностного ультрацентрифугирования в растворе KBr [Hatch F.T., Lees R Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология.S., 1968]. Для получения аполипопротеинов проводили делипидирование липопротеинов охлажденной консистенцией хлороформ-метанол (2:1) с следующей неоднократной отмывкой эфиром. Фракции, содержащие аполипопротен A-I, С и Е, очищали при помощи ионообменной хроматографии с внедрением ионообменника Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология «DEAE-Toyopeare 650 М-TSK» (Япония) [Laemli U.K., 1970]. Инкубацию теней эритроцитов с липопротеинами и их апобелками проводили при 37°С в течение 20 мин с следующим однократным отмыванием и исследованием структурных параметров мембран эритроцитов при Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология помощи флуоресцентного зонда пирен. Параллельно каждой опытнейшей пробе ставилась контрольная проба, содержавшая тени эритроцитов такого же животного с инкубационной средой (10 мМ трис-HCl буфер, рН 7.4).

Приобретенные в процессе исследования данные Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология обрабатывали с внедрением способов статистического анализа. Проверка на нормальность рассредотачивания была осуществлена при помощи аспекта Колмогорова-Смирнова. Для проверки догадки о значимости различий законов рассредотачивания исследуемых признаков для отдельных групп пациентов был использован Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология аспект Манна-Уитни (U-тест) для несвязанных выборок, для обработки результатов экспериментальных данных – аспект Вилкоксона для попарносвязанных выборок. Для выявления многофункциональных взаимосвязей меж группами изученных характеристик использовали вычисление коэффициента ранговой корреляции Спирмена Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология. Рассредотачивание общей группы нездоровых по категориям было осуществлено при помощи кластерного анализа способом К-средних.

^ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

На сегодня имеется много данных, свидетельствующих о том, что зрелые эритроциты обновляют собственный Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология липидный состав благодаря взаимодействию с ЛПВП, ЛПНП и ЛПОНП [Quarford S.H., 1970; Faergeman O., Havel R.J., 1975; Poon R., 1981; Hollan S. et al., 1995, 1996; Broncel M. et al., 2005]. Доказательством наличия обменных процессов меж плазменными липопротеинами Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология и мембраной эритроцитов является и установление факта дезорганизации липидного бислоя бардовых кровяных клеток у нездоровых с дислипопротеинемиями.

Бессчетные данные литературы молвят о широкой распространенности нарушений липидного обмена у нездоровых сладким диабета Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология как типа 1, так и типа 2, связанных сначала с нарушением гормональной регуляции метаболических процессов [Manzato E. et al., 1989; Hanefeld M., 1994; Деменкова, 2001; Яфасов К.М., Дубянская Н.В., 2001; Потеряева О.Н. и соавт Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология., 2003; Vergès B., 2005; Lapolla A. et al., 2006]. Согласно данным наших исследовательских работ, у нездоровых СД 1 липопротеиновый диапазон сыворотки крови характеризовался увеличением концентрации общего ХС, конфигурацией субфракционного состава ЛПВП и увеличением индекса атерогенности. При Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология всем этом выраженность метаболических нарушений у пациентов с СД 1 зависела от продолжительности диабета, стадии компенсации углеводного обмена и наличия сосудистых осложнений: было отмечено выраженное увеличение содержания общего ХС у пациентов с Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология течением заболевания более 5 лет либо с сосудистыми отягощениями II и III стадии (рис. 1.). Пациенты с СД 2 характеризовались более выраженными и различными отклонениями характеристик липидного обмена: увеличение содержания общего холестерина и триацилглицеридов в сыворотке Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология крови наряду со понижением концентрации ХС ЛПВП (табл. 2).

Механизмы развития гиперхолестеринемии, как было обозначено выше, при сладком диабете связаны с нарушением гормональной регуляции. При всем этом инсулярная дефицитность проявляется не только Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология лишь в нарушении углеводного и жирового обмена, да и активацией контринсулярных гормонов. Гипертриглицеридемия связана с увеличением содержания ЛПОНП. У пациентов, страдающих СД типа 2, в сыворотке крови было найдено повышение концентрации всех подфракций ЛПОНП (табл Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология. 2). Так, содержание ЛПОНП1 у нездоровых СД 2 превышало соответственный показатель у здоровых доноров в 1,8 раз (р<0,01), а концентрация ЛПОНП2 был выше в 2,2 раза (р<0,001) (табл. 2).

Как считают исследователи, увеличение образования ЛПОНП в печени получается Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология благодаря увеличенному поступлению жирных кислот [Cummings M.H., 1995], также отсутствию ингибирующего воздействия инсулина на продукцию и формирование ЛПОНП [Reaven G.M., 1981; Tobey T.A., 1981; Malmström R., 1997]. Не считая того Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология, дискуссируется возможность роста синтеза жирных кислот в печени de novo [Shimomura I., 2000; Tobe K., 2001].

Таблица 2

^ Результаты исследования липопротеинового диапазона сыворотки

крови у нездоровых сладким диабетом типа 1 и 2, Me(Q1-Q3)


Показатель

Здоровые Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология доноры

^ Нездоровые сладким

диабетом типа 1

Нездоровые сладким

диабетом типа 2

ЛПВП, мг/дл

292,98

(246,29-334,75)

236,89 (183,22-305,14)

p1>0,05

295,17 (234,25-358,76)

p1>0,05; p2>0,05

ЛПВП3, мг/дл

130,68

(62,06-182,31)

91,73 (64,41-135,47)

p1>0,05

126,94 (98,30-225,12)

p1>0,05; p2<0,05

ЛПВП2, мг/дл

161,86

(123,54-203,81)

111,46 (56,48-148,00)

p1<0,05

115,85 (51,56-167,08)

p1<0,05; p2>0,05

ЛПНП, мг/дл

457,06

(356,93-513,69)

435,71 (324,62-612,80)

p1>0,05

533,31 (428,62-586,60)

p1>0,05; p2>0,05

ЛПНП2-3, мг/дл

246,66

(200,16-290,94)

316,76 (210,41-411,35)

p1<0,05

328,55 (264,78-364,41)

p1<0,05; p2>0,05

ЛППП, мг/дл

214,20

(144,77-241,75)

189,97 (84,98-192,82)

p1>0,05

197,51 (98,41-267,76)

p Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология1>0,05; p2>0,05

ЛПОНП, мг/дл

53,47

(42,24-115,01)

53,45 (22,62-100,16)

p1>0,05

124,85 (67,79-246,87)

p1<0,01; p2<0,01

ЛПОНП2, мг/дл

44,39

(26,59-97,23)

47,94 (15,99-84,55)

p1>0,05

96,02 (57,09-200,86)

p1<0,05; p2<0,001

ЛПОНП1, мг/дл

15,20

(9,56-22,44)

13,35 (6,62-25,50)

p1>0,05

27,43 (18,35-36,78)

p1<0,05; p2<0,01

Общий холестерин, мг/дл

169,63

(153,95-190,51)

258,06 (193,05-306,42)

p1<0,05

303,80 (264,89-353,31)

p1<0,001; p2<0,01

Общие триглицериды, мг/дл

150,39

(128,69-170,16)

119,38 (70,90-188,48)

p1>0,05

213,67 (166,51-247,55)

p1<0,001; p2<0,01

ХС/ФЛ

0,911

(0,882-0,957)

0,960 (0,941-1,027)

p Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология1<0,01

0,960 (0,923-1,008)

p1<0,01; p2>0,05

ХС ЛПВП, мг/дл

57,87

(48,48-61,73)

43,91 (29,26-56,81)

p1<0,05

48,13 (38,68-59,59)

p1<0,05; p2>0,05

Индекс

атерогенности

1,92

(1,81-2,04)

4,87 (3,39-6,29)

p1<0,01

5,37 (3,99-7,61)

p1<0,01; p2>0,05

апоЛПВП, мг/дл

143,83

(129,55-179,94)

111,15 (92,15-168,25)

p1>0,05

150,46 (131,57-204,20)

p1>0,05; p2<0,05

апоЛПНП, мг/дл

77,53

(63,85-96,62)

88,96 (64,14-105,94)

p1>0,05

96,42 (77,44-106,97)

p1>0,05; p2>0,05

апоЛПОНП, мг/дл

5,51

(3,47-12,37)

3,82 (1,85-10,26)

p1>0,05

12,17 (6,49-26,95)

p1<0,05; p2<0,01


Примечание. Тут, и в табл. 3: p1 – уровень значимости различий по Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология сопоставлению со значениями у здоровых доноров; p2 – уровень значимости различий по сопоставлению со значениями у пациентов сладким диабетом типа 1. ЛПНП – липопротеины низкой плотности, ЛПОНП – липопротеины очень низкой плотности, ЛПВП – липопротеины Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология высочайшей плотности, ХС ЛПВП – холестерин липопротеинов высочайшей плотности



а) б)



в)


Рис. 1. Содержание подфракции 2 липопротеинов высочайшей плотности (ЛПВП2), холестерина липопротеинов высочайшей плотности (ХС ЛПВП), суммарных апобелков липопротеинов высочайшей плотности (апо ЛПВП) и общего Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология холестерина у нездоровых сладким диабетом типа 1 зависимо от продолжительности сладкого диабета (а), степени компенсации углеводного обмена (б) и степени сосудитых осложнений (в).

Примечания. Тут, и в рис. 2-3: * p<0,05 по сопоставлению со значениями здоровых доноров; ** p<0,01 по Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология сопоставлению со значениями здоровых доноров; *** p<0,001 по сопоставлению со значениями здоровых доноров.


Анализируя данные конфигурации главных характеристик липидного диапазона сыворотки крови у нездоровых сладким диабетом в согласовании с систематизацией D. Fredrikson, нами было отмечено Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология нередкое развитие ДЛП IIб типа (у 29,4 % нездоровых СД 1 и у 40,6 % нездоровых СД 2) и IIа типа (22,2 % нездоровых СД 1 и 40,6 % нездоровых СД 2); IV тип ДЛП (12,5% нездоровых СД 2) встречался пореже. Таким макаром, были выделены Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология категории пациентов СД с разными нарушениями липидного обмена с учетом типа и степени их выраженности.

К истинному времени сформировалось мировоззрение, что при сладком диабете патология липидного обмена делает базу для Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология дезорганизации структуры и функции мембран эритроцитов [Кондратьева Е.И., 2001; Broncel M. et al., 2005] В этой связи особенный энтузиазм представляет выявление общих закономерностей и особенностей модификации мембран эритроцитов у нездоровых сладким диабетом с разными нарушениями Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология липидного метаболизма.





Рис. 2. Содержание фракций фосфолипидов в мембране эритроцитов у нездоровых сладким диабетом типа 1 и 2


Как проявили хроматографические исследования, конфигурации относительного содержания фракций мембранных липидов эритроцитов у всех пациентов с сладким Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология диабетом были фактически однонаправленными и характеризовались повышением толики ХС и его эфиров, понижением содержания ФЛ. При всем этом посреди ФЛ преобладали легкоокисляемые формы (фосфатидилсерин, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилинозитолы) на фоне значимого уменьшения толики ФХ Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология, составляющего базу липидной фазы мембран эритроцитов у здоровых доноров, повышалось содержание лизофосфолипидов (рис. 2.).

Понятно, что размеренное соотношение меж фракциями фосфолипидов является нужным условием рационального функционирования мембраны эритроцита [Черняк Н.Б., 1976; Крепс Е Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология.М., 1982]. Повышение содержания ФС и ФИ на фоне уменьшения толики ФХ приводит к значимой дезорганизации липидного бислоя, проявляющейся сначала нарушением асимметрии мембраны. Выявленное у пациентов с СД увеличение содержания лизофосфолипидов может Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология быть связано как с увеличением гидролиза ФЛ, так и со понижением активности лизо-фосфолипазы. В литературе есть данные, дозволяющие считать, что ЛПВП учавствуют в «регенерации» бислоя, удаляя перекисномодифицированные остатки ФЛ, тем участвуя в восстановлении Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология липидной фазы [Климов А.Н. и соавт., 2001]. Таким макаром, дефицитность ЛПВП содействует усугублению дегенеративных процессов, протекающих в мембране. У пациентов с СД 2 наибольшее увеличение содержания лизофосфолипидов в мембранах бардовых клеток Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология крови было отмечено у нездоровых с сопутствующим ожирением и оказалось равным 12,5 (6,0-20,0) %.

Считают, что деградация фосфолипидного остова является одной из обстоятельств увеличения содержания ХС в мембране эритроцитов при патологии. В итоге завышенной активности фосфолиполиза и свободно Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология-радикального окисления происходит разрушение фосфолипидных молекул, вследствие чего миниатюризируется их содержание в мембране, замещаясь на молекулы ХС [Болдырев А.А., 1990, 2006] . При дислипопротеинемиях наибольшее значение приобретает нарушение взаимодействия липопротеинов и плазмалеммы. В кровотоке Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология повсевременно происходит обмен липидными компонентами меж мембраной эритроцитов и плазменными липопротеинами, при этом ХС перебегает в мембрану от ЛПОНП и ЛПНП, откуда может быть его включение в состав ЛПВП. Тем формируется Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология сбалансированная система липопротеинов и плазмалеммы бардовых кровяных клеток, участвующая в регуляции структурного состояния последней [Bruckdorfer K.R., 1967; Quarford S.H., Hilderman H.L. 1970; Hollan S. et al., 1995, 1996; Broncel M. et al Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология., 2005]. Изменение соотношения липопротеиновых комплексов приводит к нарушению равновесия передвижения ХС, при всем этом существенное превалирование количества липопротеинов атерогенных классов над содержанием ЛПВП делают условия для преимущественного поступления ХС в мембраны эритроцитов.

По Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология данным нашего исследования у пациентов с сладким диабетом увеличение содержания ХС в мембранах эритроцитов было достоверно весомым; при этом степень роста толики ХС в мембранах не различалась у нездоровых СД 1 и СД Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология 2 (рис. 3.). Необходимо подчеркнуть, что у этих пациентов выявлялось повышение значений индекса атерогенности и дела ХС/ФЛ в сыворотке крови. Все же направляло на себя внимание, что существенное увеличение толики ХС в Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология мембранах эритроцитов у пациентов с СД 1 не коррелировало с какими-либо особенностями клинического течения заболевания. Но у нездоровых СД 2 было отмечено повышение толики эстерифицированного ХС по сопоставлению с его содержанием у пациентов СД 1 и Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология здоровых доноров. Как понятно, эстерификация ХС – один из методов его модификации, содействующий следующей акцепции ЛПВП [Болдырев А.А., 1990]. Потому скопление эфиров ХС в мембранах эритроцитов у нездоровых с большими значениями концентрации Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология сывороточного ХС свидетельствует о недостаточной функции ЛПВП.

Считается, что повышение толики ХС неблагоприятно сказывается на динамических свойствах липидов мембраны, потому что благодаря собственному воздействию на подвижность жирнокислотных хвостов липидного окружения, он Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология содействует увеличению микровязкости мембраны. Скопление холестерина в бислое может приводить к ингибированию пероксидации структурированных липидов за счет ограничения молекулярной подвижности жирнокислотных остатков фосфолипидного бислоя. В данном случае ХС выступает в роли структурного Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология антиоксиданта и делает фосфолипидные молекулы более устойчивыми к действию свободных радикалов, которые в свою очередь способны разрыхлять мембранные образования [Горбунов Н.В., 1993; Клебанов Г.И., 1998]. Потому поддержание нужной жесткости мембраны холестерином тотчас Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология рассматривается как адаптивная реакция в критериях развития ряда патологических процессов.


Таблица 3

^ Результаты флуоресцентного зондирования флуорофором пирен и исследования активности Nа+,K+- ATФазы в мембранах эритроцитов

у нездоровых сладким диабетом типа 1 и 2, Me(Q1-Q Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология3)


Параметр

Здоровые доноры

^ Нездоровые сладким

диабетом типа 1

Нездоровые сладким

диабетом типа 2

J470/J370 (λв=285 нм),

усл. ед.

0,319 (0,275-0,408)

0,257 (0,206-0,302)

p1<0,01

0,334 (0,215-0,389)

p1>0,05; p2<0,05

J470/J370 (λв=340 нм),

усл. ед.

0,425 (0,340-0,449)

0,340 (0,306-0,386)

p1<0,01

0,412 (0,296-0,486)

p1>0,05; p2>0,05

J370/J390 (λв=340 нм),

усл. ед.

0,947 (0,932-0,953)

0,962 (0,946-0,972)

p Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология1<0,01

0,944 (0,937-0,953)

p1>0,05; p2<0,05

^ Величина передвижения

энергии с триптофана на пирен, %

55,77 (51,16-60,30)

47,44 (43,02-61,76)

p1>0,05

42,39 (34,14-50,81)

p1<0,01; p2<0,05

Активность Nа+,K+- ATФазы,

мкмольPi/час·мг белка

0,107 (0,039-0,183)

0,032 (0,022-0,049)

p1<0,05

0,061 (0,13-0,124)

p1<0,05; p2>0,05


Вместе с этим динамические характеристики липидов, входящих в состав бислоя, определяются огромным Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология количеством причин, посреди которых имеют значение степень насыщенности и длина ацильных цепей, состояние и количество белка в мембране, pH и ионная сила [Кагава Я., 1985; Болдырев А.А., 1990]. Для определения роли нарушения Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология липопротеинового обмена в механизмах структурных конфигураций липидного бислоя мембран эритроцитов нами была проведена оценка их микровязкостных параметров у нездоровых с ДЛП. Результаты наших исследовательских работ подтвердили наличие нарушения динамических параметров липидной фазы Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология мембран эритроцитов у нездоровых сладким диабетом (табл. 3). Так, было установлено достоверное понижение соотношения интенсивностей флуоресценции эксимерных и мономерных молекул пирена (J470/J370), регистрируемых при длине волны возбуждающего света 340 нм (на 25% по сопоставлению с Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология нормой), что является отражением возрастания микровязкости липидной фазы мембран. При исследовании структуры мембран эритроцитов у нездоровых СД 1 в области белок-липидных контактов также было выявлено возрастание их микровязкости, на что указывало Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология понижение (на 23% по сопоставлению с нормой) степени эксимеризации пирена при λВ=285 нм.

В процессе исследования было также показано, что выраженность выявленных конфигураций микровязкости мембраны зависела от продолжительности диабета. А именно, характеристики Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология флуоресценции зонда пирен у пациентов СД 1 со стажем диабета наименее 5 лет значимо не отличались от подобных характеристик у здоровых доноров (величина коэффициента J470/J370 при λВ=285 нм составила 0,323 (0,227-0,348) усл. ед., а при λВ Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология=340 нм – 0,371 (0,342-0,417) усл. ед.). Увеличение микровязкости мембран эритроцитов у пациентов с более долгим течением СД 1 по сопоставлению со бодрствующими лицами было более выраженным, о чем свидетельствовали значимо более низкие характеристики степени эксимеризации Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология пирена как при λВ=285 нм (величина коэффициента J470/J370 составила 0,248 (0,203-0,293), p<0,01), так и при λВ=340 нм (величина коэффициента J470/J370 составила 0,321 (0,304-0,376) усл. ед., p<0,01). В группе пациентов с декомпенсацией углеводного обмена было отмечено достоверное повышение Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология коэффициента J370/J390 (0,962 (0,960-0,970) усл. ед., p<0,01) при λв=340 нм, отражающего степень полярности окружения зонда пирен. Изменение других характеристик флуоресценции у нездоровых СД 1 с различной компенсацией углеводного обмена имело схожую степень выраженности.

Липопротеины Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология, участвуя в регуляции хим состава липидного компонента мембраны, оказывают влияние и на её структурные характеристики, что подтверждается данными корреляционного анализа. Так, при обследовании нездоровых СД 1 были выявлены корреляционные связи меж параметрами флуоресценции зонда пирен Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология и показателями липидного диапазона сыворотки крови. При всем этом у нездоровых сладким диабетом отмечалась положительная корреляция меж коэффициентом полярности окружения зонда пирен и содержанием подфракции ЛПОНП1 (r=0,79, р<0,01). Было также найдено, что ЛПВП Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология оказывают подходящее воздействие на величину микровязкости интегрального слоя липидной фазы мембран эритроцитов, на что указывало наличие прямой корреляции меж содержанием ЛПВП и коэффициентом эксимеризации пирена при λв=340 нм (r=0,73, р<0,05).

Очень достойные Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология внимания результаты были получены при оценке микровязкости липидной фазы мембран эритроцитов у пациентов с СД 2, отличавшихся существенными нарушениями липидного диапазона сыворотки крови. Так, у обследованных нездоровых СД 2 медиана значений характеристик флуоресценции зонда пирен при Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология содействии с мембраной эритроцитов статистически не отличалась от соответственного параметра в группе здоровых доноров (табл. 2). Но анализ приобретенных данных способом К-средних позволил выявить посреди пациентов СД 2 кластеры с разнонаправленными переменами текучести Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология мембран эритроцитов. Систематизация данных проводилась с учетом коэффициента эксимеризации зонда пирен при λв=340 нм и λв=285 нм, также коэффициента полярности J370/J390. В 1-ый кластер были объединены 36% пациентов со сниженными величинами Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология коэффициентов J470/J370 при λв=340 нм (средние значения составили 0,220±0,025 усл. ед.) и λв=285 нм (средние значения – 0,182±0,014 усл. ед.), также уменьшенными значениями коэффициента полярности окружения зонда пирен (средние значения – 0,914±0,027 усл. ед.). У пациентов этого Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология кластера было отмечено наименее выраженное увеличение индекса атерогенности по сопоставлению с нездоровыми других групп (значения составили 4,25 (3,83-5,76)). Особенностью данного кластера пациентов явилось высочайшее содержание в крови ТГ и ЛПОНП (содержание ТГ Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология составило 248,57 (181,44-269,43) мг/дл, ЛПОНП – (285,68 (116,87-291,95) мг/дл)). ЛПОНП включают много насыщенных жирных кислот, что, возможно, может обеспечивать дезорганизацию структуры мембран эритроцитов в связи с уплотнением липидных молекул относительно друг дружку. При всем Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология этом принципиально отметить понижение коэффициента полярности окружения зонда пирен в мембране эритроцитов J370/J390 (средние значения – 0,914±0,027 усл. ед.) у данной группы пациентов, свидетельствующее об уменьшении количества полярных групп интегральной зоны.

Вместе с этим была выделена Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология группа нездоровых СД 2, у каких мембрана эритроцитов характеризовалась завышенной текучестью и высочайшей полярностью гидрофобного слоя. У пациентов этой группы были зарегистрированы увеличенные значения J470/J370 при λв=340 нм (средние значения – 0,548±0,057 усл. ед Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология.) и при λв=285 нм (средние значения – 0,574±0,040 усл.ед.). При всем этом средняя величина коэффициента полярности J370/J390 оказалась выше, чем у пациентов первого класса (0,955±0,007 усл. ед., p<0,05). В этот кластер были включены Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология 25% нездоровых СД 2 с большими значениями индекса атерогенности (8,73 (5,37-12,30)) и минимальным содержанием ЛПВП (243,03 (120,64-330,95) мг/дл). Возможно, гидрофильные продукты ПОЛ в огромных количествах, накапливаясь в мембранах при недостающем содержании в плазме ЛПВП, владеют детергентным действием и Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология содействуют увеличению разупорядоченности липидного бислоя [Каган В.Е. и соавт., 1975; Новиков К.Н., 2004]. Это в свою очередь вызывает повышение подвижности полипептидных цепей интегральных белков в мембране. Высочайшая полярность группировок (гидроперекисных, гидроксильных Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология, карбонильных), появляющихся в итоге индукции ПОЛ в полиеновых “хвостах” фосфолипидов, нарушает гидрофобные белок-липидные взаимодействия в мембране. Таким макаром, из-за роста степени ненасыщенности, лишней пероксидации меняется направленность ацильных остатков.

Характеристики Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология микровязкостных параметров мембраны эритроцитов у пациентов третьей группы, в состав которой были включены 39% обследованных пациентов СД 2, соответствовали последующим значениям: средние величины коэффициента J470/J370 составили 0,434±0,018 усл. ед. при λв=340 нм и Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология 0,348±0,016 усл. ед. при λв=285 нм. Выраженность нарушений липидного обмена у этих нездоровых также носила фактически промежный нрав. Таким макаром, отмеченное нами обилие структурных нарушений мембран эритроцитов, видимо, определяется разными проявлениями воздействия ряда причин Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология, имеющих воздействие на биофизические характеристики мембраны. К их числу, на наш взор, правомерно отнести нарушения липидного обмена.

При рассмотрении конфигураций структурных параметров мембран эритроцитов у пациентов с разными типами ДЛП отмечено повышение микровязкости Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология мембран эритроцитов у нездоровых с завышенным содержанием в сыворотке крови ЛПОНП. Структурные характеристики мембран бардовых кровяных клеток у нездоровых с другими типами ДЛП не различались ни меж собой, ни с надлежащими параметрами Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология у здоровых доноров.

Как показало проведенное нами исследование, в мембранах эритроцитов у нездоровых СД угнетена активность Na+,K+-ATФазы (табл. 3). Не исключено, что ингибирование активности Na+,K+-ATФазы является результатом выявленной Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология структурной модификации липидного матрикса мембран эритроцитов. Принятой является точка зрения о том, что регулирующая роль липид-белковых взаимодействий для Na+,K+-ATФазы сводится к обеспечению ее каталитических функций и переходов меж разными конформационными Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология состояниями средством поддержания определенной микровязкости мембраны, также за счет взаимодействия заряженных боковых цепей этих ферментов с полярными головками мембранных липидов [Грибанов Г.А., 1991; Зелинский Б.А., 1994; Успенская Ю.А., 2002].

Рассматривая механизмы структурной модификации Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология мембраны эритроцитов, принципиально отметить множественность внутри- и внеклеточных эффекторов, которые могут индуцировать друг дружку либо оказывать свое воздействие изолированно. При СД имеют значение гипергликемия, стадия ее компенсации, активация свободно-радикального окисления Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология и дефицитность антиоксидантных систем, также нарушения липидного обмена. А именно понятно, что липопротеины как одна из регуляторных систем организма имеет значение для поддержания структурного гомеостаза клеточных мембран. Нарушение транспорта липидов Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология может привести к срыву реакций адаптации и формированию необратимых нарушений в мембранах. Вот поэтому исследование изолированного деяния липопротеинов на мембрану эритроцитов в опытах in vitro представилось нам очень увлекательным.

Выше было обозначено на Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология важную роль липопротеинов в обновлении мембранных компонент, при этом ЛПВП, ЛПНП и ЛПОНП могут оказывать разнонаправленные эффекты, меняя тем структурно-функциональные характеристики мембраны. Некие создатели подразумевают факт появления комплекса эритроцит-липопротеин, в Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология каком и происходит свободная диффузия ХС [Болдырев А.А., 1990]. Изучая спектральные свойства взаимодействия липотропного зонда пирен с мембраной эритроцитов крыс до и после инкубации мембранной взвеси с липопротеинами главных классов (ЛПВП, ЛПНП Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология и ЛПОНП), мы нашли преобразующее воздействие, проявляющееся в изменении текучести липидной фазы и нрава белок-липидных взаимодействий (табл. 4). Разумеется, что образование комплекса липопротеин-мембрана сопровождается краткосрочными локальными переменами физико-химических параметров Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология бислойной структуры, которые содействуют молекулярному обмену липидов. Сформировавшийся комплекс, возможно, представляет собой необыкновенную структуру с существованием раздела фаз, преодолевать который помогают силы гидрофобного взаимодействия.

Таблица 4

^ Результаты флуоресцентного зондирования флуорофором пирен мембраны

эритроцитов у крыс при Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология инкубации с липопротеинами высочайшей плотности (ЛПВП),

липопротеинами низкой плотности (ЛПНП) и липопротеинами очень низкой

плотности (ЛПОНП), Me(Q1-Q3)


Этапы

исследования

Характеристики

J470/J370

(λв=285 нм),

усл. ед.

J470/J370

(λв=340 нм Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология),

усл. ед.

J370/J390

(λв=340 нм),

усл. ед.

^ Величина передвижения энергии с триптофана на пирен, %

Взаимодействие с ЛПВП:

до инкубации

0,162

(0,134-0,195)

0,242

(0,226-0,257)

0,780

(0,773-0,793)

43,75

(40,00-44,74)

после

инкубации

0,229

(0,159-0,275)

p>0,05

0,347

(0,280-0,380)

p<0,05

0,775

(0,767-0,844)

p>0,05

47,00

(43,48-47,59)

p>0,05

Взаимодействие с ЛПНП:

до инкубации

0,203

(0,192-0,234)

0,332

(0,253-0,438)

0,829

(0,778-0,880)

46,50

(43,67-50,00)

после

инкубации

0,235

(0,222-0,286)

p>0,05

0,408

(0,373-0,428)

p<0,05

0,820

(0,761-0,833)

p>0,05

53,12

(46,15-54,84)

p<0,05

Взаимодействие с Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология ЛПОНП:

до инкубации

0,230

(0,183-0,294)

0,332

(0,245-0,439)

0,829

(0,776-0,844)

46,50

(42,63-50,00)

после

инкубации

0,253

(0,200-0,296)

p<0,05

0,357

(0,312-0,446)

p<0,05

0,810

(0,771-0,869)

p>0,05

50,00

(47,00-64,29)

p<0,05


Примечание: р – уровень значимости различий по сопоставлению со значениями характеристик, характеризующих состояние мембран эритроцитов у крыс до инкубации с липопротеинами


Ранее отмечалось, что мембрану ХС покидает в этерифицированном виде Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология. Будучи наименее полярными соединениями, эфиры ХС легче проходят через границу раздела фаз, где связываются с ЛПВП и подвергаются предстоящему метаболизму. Может быть, приток ХС от ЛПНП и ЛПОНП в мембрану проходит Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология схожим образом, исключительно в оборотном направлении. Принципиальное значение в этих перемещениях имеют входящие в состав липопротеинов апобелки. Понятно, что белки понижают энергию активации, нужную для десорбции липидов в водянистую фазу, тем облегчая процесс Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология переноса амфипатной молекулы [Sprong H., 2001]. Не считая того, особенности строения аполипопротеинов, высочайшая степень спирализации структуры и наличие амфипатных областей, ответственных за связывание с липидами, обусловливает их детергентные характеристики [Поляков Л.М., Панин Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология Л.Е., 2000]. На наш взор, исследование воздействия очищенных аполипопротеинов (А-I, С и Е) при ДЛП является закономерным продолжением исследования устройств модификации мембраны эритроцитов. Нами были обнаружены принципные различия воздействия этих Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология апобелков. А именно, аполипопротеин А-I, наибольшее количество которого находится в ЛПВП, оказывал «разжижающее» действие на мембрану эритроцитов. Об этом свидетельствовали достоверное увеличение дела интенсивностей флуоресценции димерной и мономерной форм флуорофора пирен Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология (J470/J370) после инкубации с веществом апобелка как при длине волны возбуждающего света 340 нм (значения коэффициента до инкубации составили 0,240 (0,237-0,253) усл. ед., после – 0,353 (0,318-0,403) усл.ед. при, p<0,05), так и при 285 нм (значения коэффициента до – 0,167 (0,159-0,190) усл Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология. ед., после инкубации составили 0,283 (0,214-0,322) усл.ед., p<0,05). При всем этом в мембране изменялся нрав белок-липидных взаимодействий. Медиана величины передвижения энергии с триптофана на пирен возросла с 42,63 (40,00-43,75) % до и до 46,06 (44,64-47,62) % – после Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология инкубации (p<0,05).

Понятно, что апо A-I способен связывать свободный ХС, являясь очень сильным его акцептором, и опосредует его оборотный транспорт в печень. По данным А.Н. Климова и соавт. [1984, 1992], стерин способен создавать комплексы Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология с апопротеином A-I без вовлечения ФЛ. При всем этом образование комплекса происходит методом взаимодействия холестеринового гидроксила с гуанидиновыми и ε-аминогруппами аминокислотных остатков белка. При всем этом происходит уменьшение содержания ХС в мембране Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология, что сопровождается повышением количества связанной воды и понижением жесткости липидного бислоя.

Другое воздействие оказывает на мембрану аполипопротеин С. Исследование интенсивности флуоресценции димерной и мономерной форм флуорофора пирен (J470/J370) при Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология длине волны возбуждающего света 285 нм выявило понижение значения коэффициента эксимеризации, свидетельствующее об увеличении жесткости мембраны в зоне белок-липидных взаимодействий. Значения изучаемого параметра до инкубации с апо С составили 0,200 (0,166-0,250) усл. ед., после инкубации – 0,174 (0,118-0,214) усл Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология. ед. Величина соотношения интенсивностей флуоресценции мономеров пирена (J370/J390) при λв=340 нм после взаимодействия с апо С оказалась достоверно ниже и составила 0,763 (0,703-0,784) усл. ед. (при 0,831 (0,772-0,950) усл.ед. до инкубации p<0,05). Многофункциональные особенности Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология апо С позволяют нам представить вероятный механизм подобного взаимодействия: вероятнее всего, выявленный эффект обоснован связыванием аполипопротеином жирнокислотных хвостов фосфолипидов [Панин Л.Е. и соавт., 2001].

Вместе с этим оказалось, что аполипопротеин Е не Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология изменяет спектральные свойства взаимодействия мембраны эритроцита с зондом пирен, обнаруживая свою хим инертность по отношению к липидному бислою в критериях нашего опыта. Понятно, что апо Е также, как и апо A Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология-I, является сильным акцептором ХС. Но отсутстсвие конфигураций биофизических параметров мембраны после инкубации с этим аполипопротеином позволяет мыслить, что для воздействия на структуру мембран нужны какие-то другие дополнительные причины.

Таким макаром, состояние Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология липидной фазы мембран эритроцитов обеспечивается внутриклеточными и внеклеточными механизмами регуляции (рис. 4). Для эритроцита – безъядерной клеточки – посреди внутриклеточных устройств имеют значение сначала процессы свободно-радикального окисления ненасыщенных жирных кислот, фосфолиполиз, транслокация липидных молекул Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология в мембранах и др. Посреди плазменных причин, влияющих на метаболизм липидов мембран эритроцитов, рассматривается значение липопротеинов как структур с аналогичной молекулярной организацией.

По результатам нашего исследования, у пациентов с сладким диабетом характеристики Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология микровязкости мембран эритроцитов были взаимосвязаны с показателями липидного обмена, что подтверждалось данными корреляционного анализа. Не считая того, выделенные клинические группы нездоровых СД 1, различавшиеся по степени выраженности нарушений липидного обмена, отличались и Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология по степени выраженности структурной дезорганизации мембран эритроцитов. У пациентов с СД 2 закономерности конфигурации структурных параметров мембраны бардовых клеток крови оказались труднее и зависели от нрава нарушения липидного обмена. Факт взаимодействия мембран эритроцитов Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология с липопротеинами был продемонстрирован экспериментально, при всем этом мембранотропным эффектом обладали и аполипопротеины.


ВЫВОДЫ

  1. Нарушения структуры мембран эритроцитов у нездоровых сладким диабетом типа 1 и 2 с дислипопротеинемиями характеризуются переменами липидного состава (повышение содержания холестерина и Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология его эфиров, лизофосфолипидов, фосфатидилсерина при одновременном уменьшении толики фосфатидилхолина) и микровязкости липидного бислоя, нарушением межмолекулярных липид-липидных и белок-липидных взаимодействий, также угнетением активности Na+,K+-АТФазы.

  2. Конфигурации микровязкости мембран эритроцитов, нарушение липид Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология-липидных и белок-липидных взаимодействий у нездоровых сладким диабетом типа 1 и 2 коррелируют с повышением содержания липопротеинов низкой и очень низкой плотности в сыворотке крови. Низкое содержание липопротеинов высочайшей плотности является дополнительным фактором, усугубляющим Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология нарушения структуры мембран эритроцитов.

  3. Нарушения липопротеинового состава крови и степень дезорганизации мембран эритроцитов при сладком диабете типа 2 более выражены, чем при сладком диабете типа 1. Выраженность обозначенных конфигураций при сладком диабете Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология типа 1 находится в зависимости от продолжительности заболевания, наличия декомпенсации углеводного обмена и сосудистых осложнений.

  4. Инкубация мембран эритроцитов с липопротеинами низкой и очень низкой плотности в опытах in vitro приводит к выраженным Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология наноструктурным изменениям и сопровождается переменами липид-липидных и белок-липидных взаимодействий, понижением микровязкости эритроцитарных мембран.

  5. Конфигурации структурных параметров теней эритроцитов крыс под воздействием аполипопротеина A-I и липопротеинов высочайшей плотности, владеющих свойством акцептировать Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология мембранный холестерин, в опытах in vitro имеют схожую направленность и проявляется уменьшением микровязкости липидной фазы мембран эритроцитов.

  6. Аполипопротеины С вызывают повышение жесткости анулярной зоны мембран эритроцитов и уменьшение их полярности . Аполипопротеин Е в опытах Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология in vitro не оказывает мембранотропного эффекта на тени эритроцитов.


^ Перечень РАБОТ, Размещенных ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

  1. Бутусова В.Н., Ананина Е.А. Феноменология модификации плазматической мембраны клеток при дислипидемии // VI интернациональный конгресс Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология юных ученых и профессионалов «Науки о человеке», г. Томск, 20-21 мая 2005 г. - Томск, 2005. - С.2-3.

  2. Бутусова В.Н., Рязанцева Н.В., Кравец Е.Б, Яковлева Н.М., Кощевец Т.Ю., Ананина Е.А., Жаворонок Т.В Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология., Биктасова А.К. Особенности структуры и функции мембраны эритроцитов у нездоровых сладким диабетом с сопутствующей гиперхолестеринемией // Материалы научно-практической межрегиональной конференции, посвященной 70-летию ГОУ ВПО Новосибирской гос мед академии «Актуальные Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология трудности современной эндокринологии». - Новосибирск: Изд-во НГТУ. - 2005. - С. 88-89.

  3. Кравец Е.Б., Рязанцева Н.В., Яковлева Н.М., Бутусова В.Н., Тухватулин Р.Т., Новикова Л.К. Молекулярные нарушения мембраны эритроцитов при сосудистых осложнениях сладкого Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология диабета типа 1 // Сладкий диабет. - 2006. - № 1. - С. 10-17.

  4. Яковлева Н.М., Рязанцева Н.В., Бутусова В.Н. Конфигурации структурно-функционального статуса мембраны эритроцитов при сосудистых осложнениях сладкого диабета типа 1 // XI Всероссийская научно-практическая конференция «Молодые Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология ученые в медицине», г. Казань, 26-27 апреля 2006 г. - Казань: ЗАО « Новое знание», 2006. - С.189.

  5. Новицкий В.В., Рязанцева Н.В., Степовая Е.А., Федорова Т.С., Кравец Е.Б., Иванов В.В., Жаворонок Т Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология.В., Часовских Н.Ю., Чудакова О.М., Бутусова В.Н., Яковлева Н.М. Молекулярные нарушения мембраны эритроцитов при патологии различного генеза являются типовой реакцией организма: контуры препядствия // Бюллетень сибирской медицины. - 2006. - № 2. - С Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология. 62-67.

  6. Кравец Е.Б., Рязанцева Н.В., Яковлева Н.М., Бутусова В.Н., Чудакова О.М., Сапрыкина Э.В. Молекулярные нарушения мембран эритроцитов и тромбоцитов при сосудистых осложнениях сладкого диабета типа 1 // Бюллетень Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология сибирской медицины. - 2006. - № 4. - С. - 33-41.


^ Перечень СОКРАЩЕНИЙ

Апо – аполипопротеин

ДЛП – дислипопротеинемия

ЛПВП – липопротеины высочайшей плотности

ЛПНП – липопротеины низкой плотности

ЛПОНП – липопротеины очень низкой плотности

ПОЛ – перекисное окисление липидов

СД 1 – сладкий диабет типа 1

СД 2 – сладкий диабет типа 2

ТГ – триацилглицериды

ХМ – хиломикроны

ХС – холестерин


Создатель выражает Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология благодарность заведующей кафедрой эндокринологии и диабетологии СибГМУ проф. Е.Б. Кравец за предоставление клинического материала, д.б.н. Ф.В. Тузикову (Институт молекулярной биологии ГНЦ вирусологии и биотехнологии "Вектор") за проведение исследования Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях 03. 00. 04 биохимия 14. 00. 16 патологическая физиология липопротеинового диапазона крови у нездоровых и здоровых доноров, также благодарит проф. Л.М. Полякова и весь коллектив лаборатории молекулярной биотехнологии НИИ биохимии СО РАМН за предоставленные липопротеины и аполипопротеины для проведения экспериментального исследования.



student-team-learning-stl-obuchenie-v-komande.html
student-viigral-sud-u-voenkomata-moskovskoj-helsinkskoj-gruppi.html
studenta-gou-pedagogicheskogo-kolledzha-15.html